非凍型組織細(xì)胞RNA保存液

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非凍型組織細(xì)胞RNA保存液（RNAwait）是一種在較高溫度下保存動(dòng)物組織及細(xì)胞RNA樣品的非凍型無毒溶液，它能迅速滲入細(xì)胞內(nèi)，通過高效抑制RNase的活性而保存RNA的完整性。
保存條件：15–25℃，保質(zhì)期2年。低溫條件下有結(jié)晶析出時(shí)加熱至37℃溶解后使用。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1．操作簡單，將組織剪薄浸沒在RNAWAIT中即可使其RNA不被降解。
2．替代液氮，使樣品的保存不需液氮，干冰或-80℃冰箱，尤其適用于臨床和野外樣品的快速和大規(guī)模采集。
3．RNA完整，因RNAwait能迅速抑制組織中RNA酶的活性，故從中提取的RNA的質(zhì)量跟液氮保存的樣品相比不相上下。
4．方便運(yùn)輸，處理過的樣品能在25℃保存一周，使樣品郵寄和運(yùn)輸變得容易和便宜，有利學(xué)術(shù)合作和交流。
5．反復(fù)凍融，經(jīng)RNAwait處理的樣品可反復(fù)凍融20次，其間可對(duì)樣品進(jìn)行各種處理而不影響最終提取的RNA的質(zhì)量。
6．結(jié)果準(zhǔn)確，RNAwait進(jìn)入細(xì)胞十分快速，基因表達(dá)在發(fā)生應(yīng)急改變前就得以鎖定，故RNA分析更能反映取樣時(shí)的真實(shí)情況。
7．可比性強(qiáng)，RNAwait能減少大規(guī)模樣品處理中的誤差，增加各次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)間的可比性，對(duì)大規(guī)模基因表達(dá)譜的分析尤其有用。
8．兼容性廣，處理過的樣品可以使用TRIzol 等試劑提取其RNA，樣品還可直接用于組織切片，免疫學(xué)和流式細(xì)胞分析而不影響RNA的質(zhì)量。
技術(shù)指標(biāo)
37℃ 一天(保存三天的樣品RNA有部分降解)
18-25℃ 一周(保存兩周的樣品RNA有輕微降解)
2-8℃ 一個(gè)月
-20℃和-80℃ 長期

操作流程：
1.根據(jù)要保存的各樣本的體積，計(jì)算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量應(yīng)當(dāng)是組織體積的10倍（100mg組織約用1ml RNAwait）；離心收集2×107細(xì)胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原則是：量寧多勿少。建議在實(shí)際操作中不要稱量組織，而直接根據(jù)目測結(jié)果加入RNAwait量，以加快操作和減少污染。例如5mm邊長的立方體組織塊，體積為125mm3=125µl，故應(yīng)當(dāng)加入1．25ml的RNAwait液。
2.將RNAwait按需要量分裝入自備保存管中。
3.快速將較大的組織切成厚度<0．5 cm的任意片狀，較小的組織直接取下，立即完全浸入RNAwait中。組織的厚度一定要<0．5 cm。組織過厚則RNAwait不能有效滲入，組織中間部位的RNA不能受到保護(hù)。較大的組織可以切成厚度<0．5 cm的任意片狀后保存，較小的組織（如大鼠的腎臟、脾臟，小鼠的大部分器官）則可以直接浸入RNAwait。
4.將收集管存放于溫度適當(dāng)?shù)牡胤剑娣艜r(shí)間不能超過該溫度下的最長存放時(shí)間(請(qǐng)看技術(shù)指標(biāo))，如果要存放在-20℃或-80℃，需先將樣品在4℃放置過夜后再轉(zhuǎn)移到最后的溫度。注：將樣品轉(zhuǎn)移到-20℃或-80℃前，需要棄掉保護(hù)液。
注意事項(xiàng)：
1．組織和細(xì)胞取材速度要快，在獲取后應(yīng)當(dāng)盡快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2．冰凍組織不能用RNAwait保存，因?yàn)镽NAwait不能有效滲入冰凍組織。
3．保存樣品的RNA提取：樣本從-20℃或-80℃冰箱取出后，復(fù)溫到室溫后，取出組織塊，再用于提取RNA。細(xì)胞樣本則復(fù)溫后低速離心收集細(xì)胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后繼的處理（如組織勻漿）可以在室溫下進(jìn)行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保護(hù)。殘留少量RNAwait保存液不影響后繼提取RNA的質(zhì)量。



非凍型組織細(xì)胞RNA保存液
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